FORMACIÓN DE HOMOCARIOCITOS HEPÁTICOS

PRODUCIDOS CON POLIETILENGLICOL.

 

I. AUSENCIA DE RECHAZO HISTOPATOLÓGICO. ASPECTO HISTOLÓGICO

PRODUCIDO POR LA FUSIÓN CELULAR.

 

JORGE GONZÁLEZ RAMÍREZ, ANGELINA NÚÑEZ,

ERNESTO GUERRERO PADILLA Y TERESA MARTÍNEZ.

 

DEPARTAMENTO DE CITOLOGÍA. INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOMÉDICAS.

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO (UNAM).

04510 MÉXICO D. F.

 

BOL. ESTUD. MÉD. BIOL., MÉX., SUPLEMENTO VOL. 32 : 219-227, 1983.

 

 

INTRODUCCIÓN.

 

 

DESDE EL  AISLAMIENTO DE CÉLULAS HÍBRIDAS HECHO POR BARSKI Y COLS. (1), LA

BIBLIOGRAFÍA ACERCA DE DIVERSOS ASPECTOS DE LA FUSIÓN CELULAR HA SIDO MUY

GRANDE, AFORTUNADAMENTE PODEMOS SEÑALAR COMO FUENTES DE REVISIÓN GENERAL

SOBRE ESTE TEMA LOS TRABAJOS DE HARRIS (14), BARSKI (2), EPHRUSSI (10) Y EL DE

RINGERTZ Y SAVAGE (18).

 

LA FUSIÓN CELULAR USANDO POLIETILENGLICOL (PEG) FUE DEMOSTRADA POR

BONNET Y ERIKSSON (3); CONSTABEL Y KAO (6); KAO Y MICHAULUK (15); Y

PONTECORVO (17). ESTA TÉCNICA RESULTO TAN BUENA E INÓCUA  QUE HA LLEGADO A

SER UNA DE LAS MEJORES TÉCNICAS DE RUTINA ACTUALMENTE EN USO PARA LA FUSIÓN

CELULAR.

 

POR LO QUE RESPECTA AL COMPORTAMIENTO DEL HÍBRIDO SE HA SEÑALADO QUE

EN HETEREOCARIOCITOS LA EXPRESIÓN FENOTÍPICA PUEDE SER DE COEXPRESIÓN COMO

LO HAN SEÑALADO WATKINS Y GRACE (23), PARA CÉLULAS DE RATÓN FUSIONADAS CON

CÉLULAS HUMANAS Y EN LAS CUALES HAY ANTÍGENOS DE AMBAS CÉLULAS; CARLSON Y

COLS. (5) TAMBIÉN SEÑALARON LA COEXPRESIÓN PARA LA MIOSINA DE CÉLULAS DE POLLO

Y RATA.  EN OTROS HETEROCARIOCITOS SE EXTINGUIERON ALGUNAS DE LAS PROPIEDADES

DE DIFERENCIACIÓN COMO LO SEÑALAN GORDON Y COHN (13), EN HÍBRIDOS DE

MACRÓFAGOS Y MELANOCITOS DE RATÓN EN LOS CUALES DESAPARECIÓ LA PROPIEDAD DE

ACTUAR COMO MACRÓFAGOS.

 

BRUMBAUGH Y SCHAL (4) DESCRIBEN LA RESTAURACIÓN DE SÍNTESIS DE PIGMENTO

EN MELACONOCITOS AMELÁNICOS DESPUÉS DE LA FUSIÓN CON ERITROCITOS DE EMBRIÓN

DE POLLO, DATO INTERESANTE YA QUE EN ESTE CASO SE TRATABA DE LA AUSENCIA

GENÉTICA DE TAL SÍNTESIS, O SEA QUE SE OBTUVO UNA COMPLEMENTACIÓN GENÉTICA. EN

EL HOMBRE TAL COMPLEMENTACIÓN HA SIDO DESCRITA POR DE WEERD-KASTELEIN Y

COLS. (7, 8) QUIENES LOGRARON, EN HÍBRIDOS DE FIBROBLASTOS DE  XERODERMA

PIGMENTOSUM  Y FIBROBLASTOS SANOS, LA RESTAURACIÓN EN LA REPARACIÓN DE ADN

EXPUESTO A RADIACIÓN ULTRAVIOLETA.  TAMBIÉN EN EL HOMBRE, GALJAARD Y COLS. (11)

LOGRARON COMPLEMENTACIÓN GENÉTICA EN LA ENFERMEDAD DE TAY-SACHS (FALTA DE

HEXOSAMINIDASA A) Y EN LA ENFERMEDAD DE SANDHOFF (FALTA DE HEXOSAMINIDASA A Y

B).

 

EN 1975 KEIGHTLEY R. G. Y COLS. (16) DESCRIBIERON LA CORRECCIÓN DE UNA

INMUNODEFICIENCIA COMBINADA EN UN NIÑO CON DEFICIENCIA DE ADENOSINA DEAMINASA

POR MEDIO DE TRANSPLANTE DE HÍGADO FETAL. EN ESTE CASO NO HUBO RECHAZO DE

INJERTO, LO CUAL PUEDE EXPLICARSE POR EL BAJÍSIMO NIVEL QUE EN DICHO PACIENTE

TENIAN TODOS LOS MECANISMOS INMUNITARIOS. POR LO QUE RESPECTA A LA FUSIÓN DE

CÉLULAS HEPÁTICAS, GARCÍA-SÁNCHEZ (12) SEÑALA LA FUSIÓN  IN VITRO  DE CÉLULAS

HEPÁTICAS SANAS DE RATA CON CÉLULAS DEL HÍGADO, TAMBIÉN SANAS, DE OTRA RATA

DONADORA; LA FUSIÓN SE REALIZÓ CON PEG. EN ESTE TRABAJO SE MENCIONA LA GRAN

UTILIDAD QUE ACARREARÍA LA POSIBLE COMPLEMENTACIÓN GENÉTICA AL SER APLICADA

DICHA TÉCNICA EN EL HOMBRE.

 

LA REACCIÓN DE RECHAZO HISTOPATOLÓGICO E INMUNITARIO HA SIDO DESCRITA

POR NUMEROSOS AUTORES. SHELL (22) DA BUENAS DESCRIPCIONES Y LA BIBLIOGRAFÍA

PERTINENTE.

 

EL OBJETIVO DE ESTE TRABAJO FUE EL DE PONER A PRUEBA LA POSIBILIDAD DE

QUE EN LA RATA LAS CÉLULAS HÍBRIDAS HEPÁTICAS PRODUCIDAS POR LA FUSIÓN CON

POLIETILENGLICOL DE CÉLULAS HEPÁTICAS AISLADAS E INYECTADAS AL HÍGADO DE UNA

RATA RECEPTORA, NO DESPERTASEN UNA REACCIÓN HISTOPATOLÓGICA DE RECHAZO

COMO SUCEDE HABITUALMENTE AL INYECTAR CÉLULAS HEPÁTICAS SIN TRATAMIENTO CON

PEG.

 

 

 

MATERIALES Y MÉTODOS.

 

SE EMPLEARON RATAS WISTAR ENTRE 3 Y 4 MESES DE EDAD, DE 300 A 400

GRAMOS DE PESO Y SIN IMPORTAR SEXO. SE UTILIZARON 40 RATAS, DE LAS CUALES 30 SE

TRATARON EXPERIMENTALMENTE Y 10 FUERON TESTIGOS. PARA AISLAR LAS CÉLULAS

HEPÁTICAS SE UTILIZÓ EL MÉTODO DE SEGLEN (19, 20, 21), MODIFICADO POR NOSOTROS

DE LA SIGUIENTE MANERA :

 

SE ANESTESIÓ LA RATA CON ÉTER Y PROCEDIENDO ASÉPTICAMENTE SE ABRIÓ LA

CAVIDAD ABDOMINAL  ADMINISTRANDOSE SOLUCIÓN NÚMERO UNO DE SEGLEN (SIN CALCIO)

POR VENOCLISIS A TRAVÉS DE LA PORTA, LIGANDOSE LA VENA CAVA INFERIOR DE MANERA

QUE EL LÍQUIDO SALIERA CLARO Y EL COLOR DEL HÍGADO SE VOLVIERA CLARO. SE

PRINCIPIÓ A PERFUNDIR COLAGENASA (LABORATORIOS GIBCO) EN SOLUCIÓN

AMORTIGUADORA MÁS CALCIO A UNA CONCENTRACIÓN FINAL DE 0.5%. SE PERFUNDIERON

50 ML. DE ESTA SOLUCIÓN RECICLÁNDOLA Y CAMBIÁNDOLA POR SOLUCIÓN FRESCA

CUANDO SU COLOR SE TORNABA OBSCURO. EL TIEMPO DE ACCIÓN DE LA COLAGENASA FUE

DE 15 MINUTOS. POSTERIORMENTE SE PERFUNDIÓ CON MEDIO BASAL DE EAGLE (9) PARA

SUSPENDER LA ACCIÓN DE LA COLAGENASA. EL HÍGADO SE COLOCÓ EN UNA CAJA DE PETRI

DONDE SE FRAGMENTÓ EN MEDIO DE EAGLE PARA LIBERAR LAS CÉLULAS HEPÁTICAS QUE

SE ENCONTRABAN PRÁCTICAMENTE SUELTAS Y SOLO CONTENIDAS POR LA CÁPSULA DE

GLISON. LA SUSPENSIÓN CELULAR ASÍ OBTENIDA SE FILTRÓ POR UNA GASA ESTÉRIL Y SE

CENTRIFUGÓ A 800 RPM. DURANTE 5 MINUTOS EN MEDIO DE EAGLE. EL BOTÓN CELULAR

SE TRATÓ CON POLIETILENGLICOL (PEG) DE PESO MOLECULAR 6,000 DILUIDO 1:1 EN

SOLUCIÓN SALINA, LA ACCIÓN DEL PEG FUE DE 40 SEGUNDOS, LAVANDOSE

INMEDIATAMENTE DESPUÉS CON MEDIO DE EAGLE Y VOLVIENDOSE A CENTRIFUGAR A 800

RPM. DURANTE 5 MINUTOS.

 

EL BOTÓN SE SUSPENDIÓ EN 5 GOTAS DE MEDIO DE EAGLE Y SE INYECTARON 0.25

ML. EN VARIOS SITIOS DEL HÍGADO DE LA RATA RECEPTORA. SE SACRIFICARÓN LAS RATAS

CADA SEMANA HASTA DOS MESES DESPUÉS DE LA INYECCIÓN INICIAL. EL LOTE DE LAS

RATAS TESTIGO SE MANEJÓ IGUAL QUE EL EXPERIMENTAL, EXCLUYENDO EL TRATAMIENTO

CON PEG.

 

LOS HÍGADOS DE LAS RATAS EXPERIMENTALES Y TESTIGOS SE FIJARON EN FORMOL

NEUTRO AL 10% Y DESPUÉS DE 48 HORAS SE INCLUYERON EN PARAFINA. SE OBTUVIERON

CORTES DE 3 MICRAS Y SE TIÑERON CON HEMATOXILINA-EOSINA. SE ESTUDIARON

APROXIMADAMENTE 50 LAMINILLAS DE CADA HÍGADO Y LAS ZONAS ADECUADAS SE

FOTOGRAFIARON POR MEDIO DEL ULTRAPHOT DE ZEISS.

 

 

 

RESULTADOS.

 

EN LAS RATAS TESTIGO, EL EXAMEN MICROSCÓPICO MOSTRÓ QUE, EN LA PRIMERA

SEMANA, LAS CÉLULAS HEPÁTICAS INYECTADAS ERAN RÁPIDAMENTE RODEADAS POR

CÉLULAS DE KUPFFER QUE INICIABAN LA DESTRUCCIÓN DE CÉLULAS EXTRAÑAS, ASÍ MISMO

SE OBSERVÓ INFILTRADO LINFOCITARIO QUE AUMENTÓ EN LAS SEMANAS SUCESIVAS. SE

CONSTITUYERON PUES LOS NÓDULOS DE RECHAZO CLÁSICAMENTE CONOCIDOS. EN LAS

FIGURAS 1 Y 2 ESTOS FENÓMENOS SON PERFECTAMENTE VISIBLES. HAY QUE SEÑALAR

QUE EL COMPORTAMIENTO CLÍNICO DE LAS RATAS TESTIGO FUE COMPLETAMENTE NORMAL.

 

EN EL GRUPO EXPERIMENTAL ENCONTRAMOS QUE EN ALGUNAS OCASIONES HABÍA

GRUPOS CELULARES DE CÉLULAS HEPÁTICAS INYECTADAS QUE AUNQUE FUSIONADAS

ENTRE SÍ, NO LO HABÍAN HECHO CON EL PARÉNQUIMA RECEPTOR, POR LO CUAL

MOSTRARON UN ASPECTO HISTOPATOLÓGICO EQUIVALENTE AL SEÑALADO PARA LOS

NÓDULOS DE RECHAZO EN LOS TESTIGOS COMO SE MUESTRA EN LA FIGURA 3.

 

SIN EMBARGO, EN LA INMENSA MAYORÍA DE LAS LAMINILLAS EXPERIMENTALES

OBSERVADAS PUDIMOS CONSTATAR LA AUSENCIA DE NÓDULOS DE RECHAZO Y LA FUSIÓN

DE LAS CÉLULAS INYECTADAS CON EL PARÉNQUIMA RECEPTOR COMO SE MUESTRA EN LA

FIGURA 4, 5 Y 6 CAUSANDO UNA ENORME FUSIÓN CON LAS COLUMNAS HEPÁTICAS,

LLEGANDOSE AL GRADO DE PRODUCIR ENORMES SINCICIOS COMO SE APRECIA EN FORMA

MUY CLARA EN LA FIGURA 6 EN LA QUE LOS LÍMITES CELULARES Y LAS COLUMNAS

HEPÁTICAS HAN DESAPARECIDO CEDIENDO SU LUGAR A GRANDES SINCICIOS EN LOS

CUALES SE PUEDEN APRECIAR NÚCLEOS CON DISTINTAS AFINIDADES TINTORIALES Y

TAMAÑOS DIVERSOS.

 

FUE FRECUENTE EL OBSERVAR ESPACIOS PORTA LIGERAMENTE DILATADOS Y AÚN

ROTOS COMO SE MUESTRA EN LA FIGURA 4. LOS SINUSOIDES MOSTRARON CON

FRECUENCIA ASPECTOS DE PEQUEÑAS GRIETAS EN EL PARÉNQUIMA CON CÉLULAS DE

KUPFFER EN SUS PAREDES COMO SE VE EN LA FIGURA 5. FUE TAMBIÉN FRECUENTE LA

CONGESTIÓN SINUSOIDAL EN DIVERSOS SITIOS DEL PARÉNQUIMA HEPÁTICO. LAS CÉLULAS

DEL SINCICIO CONSERVARON ASPECTOS NORMALES TANTO EN EL NÚCLEO COMO EN EL

CITOPLASMA. EL COMPORTAMIENTO CLÍNICO DE LAS RATAS EXPERIMENTALES FUE

COMPLETAMENTE IGUAL  AL DE LOS TESTIGOS Y A LA DE LAS NORMALES, SIN TRATAMIENTO

ALGUNO.

 

 

 

DISCUSIÓN.

 

LOS RESULTADOS OBTENIDOS EN ESTOS EXPERIMENTOS NOS PERMITEN ASEGURAR

QUE, EN LA RATA, SE PUEDE EVITAR EL RECHAZO HISTOPATOLÓGICO QUE NORMALMENTE

SE OBSERVA AL TRASPLANTAR ÓRGANOS COMPLETOS, PORCIONES DE ELLOS O CÉLULAS

AISLADAS DE UN ANIMAL A OTRO DE LA MISMA ESPECIE (22). ESTA AUSENCIA DE RECHAZO

SE DEBE A LA FORMACIÓN DE HOMOCARIOCITOS HEPÁTICOS, HÍBRIDOS SINCICIALES

PRODUCIDOS POR LA ACCIÓN FUSIONANTE DEL PEG (17).

 

EL TEMOR DE QUE EL HÍBRIDO PRODUJESE UN MOSAICO ANTIGÉNICO EN LA

MEMBRANA CELULAR Y QUE CONDUJESE A SU DESTRUCCIÓN DESAPARECIÓ

COMPLETAMENTE YA QUE A LOS DOS MESES DE EXPERIMENTACIÓN, EN LAS RATAS, EL

HÍGADO NUNCA MOSTRÓ SEÑALES DE NINGÚN TIPO DE RECHAZO. EXPERIMENTOS

RECIENTES AÚN NO PUBLICADOS POR NOSOTROS Y EN LOS CUALES HEMOS ADICIONADO AL

PEG UNA SOLUCIÓN AL 5% DE DIMETILSULFÓXIDO (DMSO) HAN INCREMENTADO AÚN MÁS

LA FUSIÓN CELULAR.

 

CABE SEÑALAR QUE EN OCASIONES SE OBSERVARON GRUPOS CELULARES

TRATADOS CON PEG E INYECTADOS EN LOS HÍGADOS RECEPTORES QUE SE FUSIONABAN

ENTRE SÍ Y NO CON EL PARÉNQUIMA RECEPTOR LO QUE OBVIAMENTE LES CONVERTÍA EN

CÉLULAS EXTRAÑAS QUE SUFRIAN EL ATAQUE INMEDIATO DE LOS MACRÓFAGOS, LA

ULTERIOR INFILTRACIÓN LINFOCITARIA Y SU TRANSFORMACIÓN EN NÓDULOS DE RECHAZO

HISTOPATOLÓGICO.

 

AFORTUNADAMENTE EN NUESTROS EXPERIMENTOS TAL SUCESO FUE RARO Y

ESPERAMOS REDUCIRLO AÚN MÁS CON LA MENCIONADA ADICIÓN DE DMSO AL AGENTE

FUSIONANTE.

 

LAS CARACTERÍSTICAS DEL NÚCLEO, NUCLEOLO Y CITOPLASMA DE LAS CÉLULAS

SINCICIALES SON COMPLETAMENTE NORMALES. SEÑALAREMOS QUE EXISTEN NÚCLEOS

DENTRO DEL SINCICIO CON DIFERENTES TAMAÑOS Y AFINIDAD TINTORIAL LO QUE NO SE

OBSERVA EN EL HÍGADO NORMAL. EL TAMAÑO VARIABLE DE LOS NÚCLEOS SE PUEDE

EXPLICAR POR LA FINURA DE LOS CORTES (3 MICRAS) Y LA SECCIÓN DE LOS NÚCLEOS A

DIVERSAS DISTANCIAS DE SUS POLOS, LO QUE DARÍA ESTA IMPRESIÓN DE VARIEDAD EN EL

TAMAÑO.

 

EN CAMBIO LA DISTINTA AFINIDAD TINTORIAL NOS ESTÁ PROBABLEMENTE

SEÑALANDO LA DIVERSIDAD DEL ORÍGEN DE LOS NÚCLEOS. LA POSIBILIDAD DE QUE

ALGUNOS DE ESTOS NÚCLEOS ESTÉN EN PROCESO DE PICNOSIS PUDIERA ARGUMENTARSE,

AUNQUE NOSOTROS LA RECHAZAMOS YA QUE A LOS DOS MESES DE EXPERIMENTACIÓN

NUNCA VIMOS ESTÉ TIPO DE DEGENERACIÓN EN NUESTRAS PREPARACIONES.

 

LAS DILATACIONES Y ROTURAS EN LOS ESPACIOS PORTA Y ZONAS ALEDAÑAS SE

COMPRENDEN FÁCILMENTE PENSANDO EN EL FUERTE AUMENTO DE PRESIÓN QUE SE

GENERA CON LA INYECCIÓN DE GRANDES MASAS DE CÉLULAS HEPÁTICAS, ASÍ COMO POR

EL TRAUMA MECÁNICO PRODUCIDO POR LA AGUJA. LA CONGESTIÓN SINUSOIDAL TAMBIÉN

TIENE EXPLICACIÓN A TRAVÉS DEL INCREMENTO DE PRESIÓN PRODUCIDO POR LA

INYECCIÓN.

 

EL IMPACTO QUE ESTAS INVESTIGACIONES TENDRÁN EN EL FUTURO INMEDIATO

SERÁ MUY GRANDE YA QUE SI BIEN SOLO HEMOS DADO EL PRIMER PASO AL DEMOSTRAR LA

AUSENCIA DE RECHAZO, EN TRABAJOS ULTERIORES SE ESTUDIARÁN SUS POSIBLES

IMPLICACIONES EN LA COMPLEMENTACIÓN GENÉTICA QUE PODRÁ DOTAR DE GENES

FALTANTES A  AQUELLOS ORGANISMOS QUE CONGÉNITAMENTE NO LOS POSEAN Y QUE

PADEZCAN DE ENFERMEDADES QUE EN LA MAYORÍA DE LOS CASOS SUELEN SER

MORTALES.

 

LA COMPLEMENTACIÓN GENÉTICA YA HA SIDO DEMOSTRADA EN CULTIVO DE TEJIDOS

POR BRUMBAUGH Y SCHAL (4), EN CÉLULAS DE AVES, Y POR DE WEERD-KASTELEIN Y

COLS. (7, 8) PARA FIBROBLASTOS HUMANOS EN XERODERMA PIGMENTOSUM  Y POR

GALJAARD Y COLS. (11) EN LA ENFERMEDAD DE TAY-SACHS.

 

EN EL CASO DE APLICACIÓN HUMANA, CABE CITAR A KEIGHTLEY Y COLS. (16)

QUIENES CORRIGIERON UNA INMUNODEFICIENCIA COMBINADA EN UN NIÑO POR MEDIO DE

TRANSPLANTE DE HÍGADO FETAL. EN ESTE TRATAMIENTO ES OBVIO SEÑALAR QUE LA

AUSENCIA DE RECHAZO SE DEBIÓ EXACTAMENTE AL BAJÍSIMO NIVEL DE DEFENSA, TANTO

INMUNOLÓGICA COMO CELULAR QUE EL PACIENTE TENÍA.

 

NUESTRO PROCEDIMIENTO, EN CAMBIO, ENCIERRA LA POSIBILIDAD DE TRATAMIENTO

NO SOLO DE LAS ENFERMEDADES MENCIONADAS SINO DE UN SINNÚMERO DE

PADECIMIENTOS QUE COMO LA HEMOFILIA HAN CONSTITUIDO AZOTES FATALES PARA

MÚLTIPLES PERSONAS Y SUS DESCENDIENTES, ASÍ COMO EL POSIBLE TRATAMIENTO DE

ENFERMEDADES COMO LA DIABETES EN LA CUAL YA NO SE FORMA INSULINA EN LOS

ISLOTES DE LANGERHANS, LO QUE PODRÍA NUEVAMENTE REALIZARSE AL ADQUIRIR DICHAS

CÉLULAS GENOMAS NUEVOS QUE SI FUERAN CAPACES DE GENERARLA. EL TRATAMIENTO

DE MÚLTIPLES ENFERMEDADES GLANDULARES TAMBIÉN ENCONTRARÍA AQUÍ UNA OBVIA

APLICACIÓN.

LA DECADENCIA GLANDULAR Y DE OTROS TEJIDOS EN LA VEJEZ ENCONTRARÍAN

ALIVIO AL INYECTARSE LAS CÉLULAS ADECUADAS, QUE DONARÍAN GENOMAS SANOS Y

JOVENES, QUE PUDIERAN COMPLEMENTAR A AQUELLOS QUE YA SE ENCUENTRAN EN

DECADENCIA.

 

EL PRIMER PASO ESTÁ DADO AL DEMOSTRAR, EN LA RATA, LA AUSENCIA DE

RECHAZO. SIN EMBARGO, ANTES DE INICIAR LA EXPERIMENTACIÓN EN EL HOMBRE, QUE

SERÁ EL ÚNICO CAMINO PARA DEMOSTRAR LA POSIBLE COMPLEMENTACIÓN GENÉTICA, YA

QUE LOS RESULTADOS EN ANIMALES, SI BIEN SON DE ENORME UTILIDAD, NO SON

TOTALMENTE EXTRAPOLABLES AL HOMBRE, ES NECESARIO PROBAR QUE LA AUSENCIA DE

RECHAZO HA SIDO POR FIN ALCANZADA.

 

RESUMEN.

 

SE UTILIZARON RATAS WISTAR DE TRES A CUATRO MESES DE EDAD CON UN PESO

DE 300 A 400 G SIN IMPORTAR EL SEXO.

 

PARA OBTENER CÉLULAS HEPÁTICAS AISLADAS SE PERFUNDIÓ EL HIGADO DE LA

RATA, PRIMERO CON UNA SOLUCIÓN SALINA LIBRE DE CALCIO Y CON HEPARINA, CUANDO EL

LÍQUIDO DRENADO ESTUVO LIBRE DE SANGRE SE PERFUNDIÓ CON COLAGENASA AL 0.5%

RECICLANDOLA DURANTE 15 MINUTOS, DESPUÉS SE PERFUNDIÓ CON MEDIO BASAL DE

EAGLE (9) PARA SUSPENDER LA ACCIÓN DE LA COLAGENASA. EL ÓRGANO SE EXTRAJÓ Y

SE FRAGMENTÓ EN UNA CAJA DE PETRI OBTENIENDOSE UNA SUSPENSIÓN CELULAR MUY

RICA EN CÉLULAS LIBRES LAS CUALES DESPUÉS DE LAVADAS Y CENTRIFUGADAS SE

RESUSPENDIERON EN 5 GOTAS DE MEDIO DE EAGLE, Y SE INYECTARON A LAS RATAS

TESTIGO 0.25 ML. INTRAHEPÁTICOS DE ESTA SUSPENSIÓN CELULAR. EN EL CASO DE LAS

RATAS EXPERIMENTALES SE TRATÓ DE BOTÓN CELULAR CON POLIETILENGLICOL DE PESO

MOLECULAR 6,000 DURANTE 40 SEGUNDOS, SE LAVO CON MEDIO DE EAGLE Y DESPUÉS

DE CENTRIFUGAR SE INYECTÓ 0.25 ML. DE SUSPENSIÓN CELULAR EN EL HÍGADO. LOS

TESTIGOS Y LAS RATAS EXPERIMENTALES SE SACRIFICARON A TIEMPOS VARIABLES, SIENDO

EL MÁXIMO HASTA 2 MESES DESPUÉS DE LA INYECCIÓN.

 

EL HIGADO DE LOS ANIMALES SACRIFICADOS SE FIJÓ EN FORMOL, SE INCLUYÓ EN

PARAFINA, SE SECCIONÓ Y SE TIÑÓ CON HEMATOXILINA Y EOSINA PARA SU ESTUDIO

HISTOPATOLÓGICO. EN LAS RATAS TESTIGO SE OBSERVARON LOS NÓDULOS DE RECHAZO

HISTOPATOLÓGICO CARACTERÍSTICO. EN CAMBIO EN LAS RATAS EXPERIMENTALES NO

HUBO RECHAZO Y SI LA FORMACIÓN DE GRANDES SINCICIOS DE CÉLULAS HEPÁTICAS

CONSTITUIDAS POR CÉLULAS DEL RECEPTOR Y LAS CÉLULAS HEPÁTICAS INYECTADAS.

ESTOS SINCICIOS SE OBSERVARON FUNDAMENTALMENTE ALREDEDOR DE LAS ZONAS

INYECTADAS Y EN TODAS LAS RATAS EXPERIMENTALES EN CUALQUIERA DE LOS TIEMPOS EN

QUE FUERON SACRIFICADAS. EL COMPORTAMIENTO CLÍNICO DE LAS RATAS TESTIGO Y LAS

EXPERIMENTALES FUE COMPLETAMENTE NORMAL DURANTE TODO EL PERIODO DE

OBSERVACIÓN.

 

 

LA IMPORTANCIA DE ESTE TRABAJO RADICA NO SOLO EN LA SUPRESIÓN DEL

RECHAZO HISTOPATOLÓGICO, SINO EN LA POSIBLE ADQUISICIÓN DE GENOMAS COMPLETOS

DE CÉLULAS DE OTRO ANIMAL. LO QUE PLANTEA LA POSIBILIDAD DE OBTENER GENES QUE

NO EXISTAN DESDE EL NACIMIENTO Y QUE SEAN CAUSA DE DIVERSAS ENFERMEDADES

CONGÉNITAS DE TIPO GENÉTICO, ASÍ COMO LA  ADQUISICIÓN DE GENOMAS JÓVENES QUE

PUEDAN CORREGIR DEFECTOS METABÓLICOS DE GENOMAS SENILES. SE SEÑALA SU

POSIBLE UTILIZACIÓN EN CASOS HUMANOS COMO POR EJEMPLO EN LA HEMOFILIA, LA

DIABETES Y EN LA SENILIDAD.

 

 

 

SUMMARY.

 

WISTAR RATS OF BOTH SEXES, 3 TO 4 MONTHS OLD, WEIGHING 300 TO 400 G

WERE INJECTED IN THE LIVER WITH ISOLATED LIVER CELLS TREATED WHIT PEG AND

OBTAINED FROM ANOTHER RAT. THE LIVERS WERE STUDIED AFTER A PERIOD OF TWO

MONTHS.

 

THE ABSENCE OF HISTOPATHOLOGICAL REJECTION WAS DEMONSTRATED. THE

DONOR CELLS FORMED A HUGE SYNCYTIUM BY FUSION WITH RECEPTOR’S PARENQUIMA.

THE CLINICAL BEHAVIOR OF THE RATS WAS ABSOLUTELY NORMAL. THE POSSIBILITIES OF

APPLICATION TO HUMAN BEINGS AS A THERAPEUTIC ATTEMPT IN CONGENITAL DISEASES

(HEMOPHILIA) AND THOSE PRODUCED BY DECADENCE OF A GENOME (DIABETES, SENILITY)

ARE POINTED OUT.

 

 

 

FIGURAS.

 

FIG. 1.-   HÍGADO DE RATA TESTIGO. UNA SEMANA DESPUÉS DE LA INYECCIÓN

INICIAL DE CÉLULAS NO TRATADAS CON PEG. LA FLECHA MUESTRA EL NÓDULO DE

RECHAZO. SE OBSERVARON EN ÉL A LAS CÉLULAS DE KUPFFER, ASÍ COMO INFILTRACIÓN

LINFOCITARIA. LAS COLUMNAS HEPÁTICAS SON MUY NÍTIDAS Y BIEN DELIMITADAS. (160 X,

TINCIÓN CON HEMATOXILINA-EOSINA).

 

FIG. 2.-   HÍGADO DE RATA TESTIGO. UNA SEMANA DESPUÉS DE LA INYECCIÓN DE

CÉLULAS NO TRATADAS CON PEG. NÓDULO DE RECHAZO HISTOPATOLÓGICO. SE PUEDEN

OBSERVAR NUMEROSAS CÉLULAS DE KUPFFER DESINTEGRANDO A LAS CÉLULAS

HEPÁTICAS INYECTADAS. LAS CÉLULAS HEPÁTICAS MUESTRAN LÍMITES NÍTIDOS. (400 X.

TINCIÓN CON HEMATOXILINA-EOSINA).

 

FIG. 3.-   HÍGADO DE RATA EXPERIMENTAL. UNA SEMANA DESPUÉS DE LA INYECCIÓN

DE CÉLULAS TRATADAS CON PEG. DICHAS CÉLULAS SE FUSIONARON ENTRE SÍ Y NO CON

EL PARÉNQUIMA RECEPTOR. LA FLECHA SEÑALA A DOS CÉLULAS QUE ESTAN SIENDO

ATACADAS POR CÉLULAS DE KUPFFER. POR ABAJO Y A LA DERECHA DE ELLAS SE OBSERVA

UNA INFILTRACIÓN LINFOCITARIA. HAY CONGESTIÓN SINUSOIDAL. (400 X. TINCIÓN CON

HEMATOXILINA-EOSINA).

 

 

FIG. 4.-   HÍGADO DE RATA EXPERIMENTAL. DOS SEMANAS DESPUÉS DE LA

INYECCIÓN INICIAL DE CÉLULAS TRATADAS CON PEG. SE OBSERVA LA FUSIÓN DE

COLUMNAS HEPÁTICAS. LOS LÍMITES CELULARES SE HAN BORRADO. EL ESPACIO PORTA SE

VE DILATADO Y ROTO. (160 X. TINCIÓN CON HEMATOXILINA-EOSINA).

FIG. 5.-   HÍGADO DE RATA EXPERIMENTAL. CUATRO SEMANAS DESPUÉS DE LA

INYECCIÓN. LAS COLUMNAS HEPÁTICAS SE HAN FUSIONADO TOTALMENTE. SE OBSERVAN

ESPACIOS SINUSOIDALES COMO GRIETAS EN EL TEJIDO, BORDEADOS POR CÉLULAS DE

KUPFFER. (250 X. TINCIÓN CON HEMATOXILINA-EOSINA).

 

FIG. 6.-   HÍGADO DE RATA EXPERIMENTAL. OCHO  SEMANAS DESPUÉS LAS

HEPÁTICAS CONSTITUYERON UN GRAN SINCICIO EN EL QUE SE OBSERVAN NÚCLEOS DE

DISTINTOS TAMAÑOS Y AFINIDADES TINTORIALES. LA ARQUITECTURA DE COLUMNAS

HEPÁTICAS HA DESAPARECIDO COMPLETAMENTE. (400 X. TINCIÓN CON HEMATOXILINA-

EOSINA).

 

 

 

REFERENCIAS.

 

1. BARSKI, G., SORIEUL, S., CORNEFERT, T. PRODUCTION DANS DES CULTURES IN VITRO DE DEUX

SOUCHES CELLULAIRES EN ASSOCIATION DE CELLULES DE CARACTERE “HIBRIDE”. C.R. ACAD. SCI. PARIS

251 : 1825-1827, 1960.

2. BARSKI, G. CELL ASSOCIATION AND SOMATIC CELL HYBRIDIZATION. INT. REV. EXP. PATHROL. 9 : 151-

190. 1970.

3. BONNETT, H. T., ERIKSSON, T. TRANSFER OF ALGAL CHLOROPLASTS INTO PROTOPLASTS OF HIGHER

PLANTS. PLANTA 120 : 71-79, 1974.

4. BRUMBAUGH, J. A., SCHALL, D. G. RESTORATION OF PIGMENT SHYNTESIS IN MUTANT

MELANOCYTES AFTER FUSION WITH CHICK EMBRYO ERYTHOCYTES. THE FIRST INTERNAT. CONGRESS ON

CELL BIOL. BOSTON, MASS. CELL BIOL. ABSTRACTS NUMBER 667, 1976.

5. CARLSON, S. A., LUGER, O., RINGERTZ, N. R., SAVAGE, R. E. PHENOTYPIC EXPRESSION IN

CHICK ERYTHROCYTES X RAT MYOBLAST HYBRIDS AND IN CHICK MYOBLAST X RAT MYOBLAST HYBRIDS.

EXP. CELL RES. 84 : 47-55, 1974.

6. CONSTABEL, F., KAO, K. N. AGGLUTINATION AND FUSION OF PLANT PROTOPLASTS BY

POLYETHYLENGLYCOL. CAN. J. BOT. 53 : 1603-1606, 1974.

7. DE WEERD-KALESTEIN, E. A., BOOTSMA, D. GENETIC HETEROGENEITY OF XERODERMA

PIGMENTOSUM  DEMONSTRATED BY SOMATIC CELL HYBRIDIZATION. NATURE (LONDON) 238 : 80-83,

1972.

8. DE WEERD-KASTELEIN, E. A., KLEIJER, W. J., SLUYTER, M. L. REPAIR REPLICATION IN

HETEROKARYONS DERIVED FROM DIFFERENT REPAIR DEFICIENT XERODERMA PIGMENTOSUM  STRAINS.

MUTAT. RES. 19 : 237-243, 1973.

9. EAGLE, H. NUTRITION NEEDS OF MAMMALIAN CELLS IN TISSUE CULTURE. SCIENCIE 122 : 501-504,

1955.

10. EPHRUSSI, B. HYBRIDIZATION OF SOMATIC CELLS. PRINCETON UNIV. PRESS, PRINCETON, 1972.

11. GALJAARD, H., HOOGEVEEN, A., DE WITT-VERBEEK, H. A., REUSER, A. J. J., KEIJZER, W.,

WESTERVELD, A., BOOTSMA, D.  TAY-SACHS AND SANDHOFF’S DISEASE : INTERGENETIC

COMPLEMENTATION AFTER SOMATIC CELL HYBRIDIZATION. EXP. CELL RES. 87 : 444-448, 1974.

12. GARCÍA SÁNCHEZ, A.  FUSIÓN DE CÉLULAS ANIMALES  Y SU POSIBLE APLICACIÓN A PROBLEMAS DE

DEFICIENCIA GENÉTICA UTILIZANDO LA SUSTANCIA QUÍMICA POLIETILENGLICOL (PEG). TESIS DE

LICENCIATURA PARA QUÍMICO-FÁRMACO-BIÓLOGO. UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA, 1980.

13. GORDON, S., COHN, Z. MACROPHAGE-MELANOCYTE HETEROKARYONS I. PREPARATION AND

PROPERTIES. J. EXPER. MED. 131 : 981-1003, 1970.

14. HARRIS, H.  CELL FUSION. THE DUNHAM LECTURES. OXFORD UNIV. PRESS. LONDON, 1970.

15. KAO, K. N., MICHAYLUK, M. R.  A METHOD OF HIGHFRECUENCY INTERGENETIC FUSION OF PLANT

PROTOPLASTS. PLANTA 115 : 355-367, 1974.

16. KEIGHTLEY, R. G., LAWTON, A. R., WU, L. Y. F., COOPER, M. D. CORRECTION OF COMBINED

INMUNODEFICIENCY BY FETAL LIVER TRANSPLANTATION IN A PATIENT WITH ADENOSINE DEAMINASE

DEFICIENCY. H. J. MEUMISSEN, J. PICKERING, B. ROLLARA, I. H. PORTER, (EDS.) : COMBINED

INMUNODEFICIENCY DISEASE AND ADENOSINE DEAMINASE DEFICIENCY ACADEMIC PRESS, NEW YORK,

1975.

17. PONTECORVO, G.  PRODUCTION OF INDEFINITELY MULTIPLYING MAMMALIAN SOMATIC CELL HYBRIDS

BY POLYETHYLENGLYCOL (PEG) TREATMENT. SOMATIC CELL GENET. 1 : 397-400, 1976.

18. RINGERTZ, N. R., SAVAGE, R. E.  CELL HIBRIDS. ACADEMIC PRESS NEW YORK, 1976.

19. SEGLEN, P. O.  PREPARATION OF A RAT LIVER CELLS. I.- EFFECT OF CA ON ENZYMATIC DISPERSION OF

ISOLATED PERFUSED LIVER. EXP. CELL RES., 74 : 450-454, 1972.

20. SEGLEN, P. O.   PREPARATION OF A RAT LIVER CELLS. II.- EFFECT OF IONS AND CHELATORS ON TISSUE

DISPERSION. EXP. CELL RES., 76 : 25-30, 1973.

21. SEGLEN, P. O.   PREPARATION OF ISOLATED RAT LIVER CELLS. IN : D. M. PRESCOT (ED.) METHODS IN

CELL BIOLOGY  ACADEMIC PRESS, NEW YORK, VOL. XIII : 29-83. 1976.

22. SELL, S.  INMUNOLOGÍA, INMUNOPATOLOGÍA E INMUNIDAD. HARLA-HARPER AND ROW

LATINOAMERICANA, MÉXICO, 1981.

23. WATKINS, J. F., GRACE, D. M.  STUDIES ON THE SURFACE ANTIGENS OF INTERSPECIFIC MAMMALIAN

CELL HETEROKARYONS. J. CELL SCI. 2 : 193-204, 1967.